Diagnóstico clínico y pruebas de detección de ciclosporosis

Consideraciones

Considere Cyclospora como una causa potencial de enfermedad diarreica prolongada, particularmente en pacientes con antecedentes de viajes recientes a áreas endémicas de Cyclospora, como las regiones tropicales y subtropicales. Las pruebas para detectar Cyclospora no se realizan de forma rutinaria en la mayoría de los laboratorios de los Estados Unidos, ni siquiera cuando se analizan heces en busca de parásitos. De manera similar, no todos los paneles de reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés) gastrointestinales incluyen la detección de Cyclospora. Los proveedores de atención médica deben solicitar específicamente una prueba de detección de Cyclospora, si es lo indicado.

Diagnóstico

La infección por Cyclospora se diagnostica al examinar muestras de heces. Hacer el diagnóstico puede ser difícil en parte porque es posible que incluso los pacientes sintomáticos no eliminen suficientes ovoquistes en las heces como para que sean fácilmente detectables en las pruebas de laboratorio. Los pacientes posiblemente necesiten suministrar varias muestras tomadas en diferentes días.

Pruebas de detección

Los laboratorios deben utilizar métodos sensibles de recuperación (procedimientos de concentración) y métodos de detección que hagan resaltar los ovoquistes de Cyclospora. Los ovoquistes pueden teñirse con la técnica acidorresistente modificada o la técnica de safranina modificada ("en caliente"). Los ovoquistes de Cyclospora también son autofluorescentes. Esto quiere decir que cuando se observan las muestras de heces que contienen el parásito en el microscopio de fluorescencia con luz ultravioleta (UV), los ovoquistes se ven azules o verdes (ver la imagen arriba) sobre un trasfondo negro. Los métodos de diagnóstico molecular, como el análisis de PCR, se utilizan para buscar el ADN del parásito en las heces.

Detección de ovoquistes

• Los ovoquistes de Cyclospora pasan desapercibidos fácilmente; es común que haya un bajo nivel de eliminación (~1-2 logs más bajos que en las especies de Cryptosporidium). Para maximizar la recuperación de ovoquistes de Cyclospora, primero concentre la muestra de heces —con métodos como la técnica de formalina-acetato de etilo (centrifugue por 10 minutos a 500 x g)— y luego examine una preparación húmeda o una preparación teñida (o ambas) del sedimento.

• Los ovoquistes de Cyclospora tienen un diámetro de ~8-10 micrómetros. En contraste, los ovoquistes de Cryptosporidium parvum/hominis tienen un diámetro de ~4-6 micrómetros.

• La microscopía de fluorescencia con luz ultravioleta (con el filtro de excitación UV a 330-365 nm o 450-490 nm) es una técnica sensible para examinar rápidamente los sedimentos de heces a fin de detectar la presencia de ovoquistes de Cyclospora, los cuales sobresalen debido a que son autofluorescentes (los ovoquistes de Cryptosporidium parvum/hominis no lo son). Si se encuentran posibles ovoquistes de Cyclospora, puede utilizarse la microscopía de campo claro, de contraste de fases o de contraste de interferencia diferencial para confirmar que las estructuras tengan los rasgos morfológicos característicos de los ovoquistes de Cyclospora (es decir, esferas no refringentes que contienen citoplasma no diferenciado o glóbulos refringentes).

• En una preparación de heces con tinción acidorresistente modificada, los ovoquistes de Cyclospora por lo general presentan acidorresistencia variable (es decir, es posible que en el mismo campo los ovoquistes no se tiñan o se tiñan de un color entre rosa claro y rojo oscuro o morado). Típicamente, los ovoquistes no teñidos tienen una apariencia arrugada (hialina).

• Si se utiliza la técnica de safranina modificada "en caliente", los ovoquistes de Cyclospora se tiñen uniformemente de un color naranja rojizo brillante.

Recursos

DPDx: Identificación en laboratorio de parásitos de preocupación para la salud pública: Ciclosporosis